Nestd-Pcr

O que é?
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É uma das variações da técnica básica de
PCR.
É Utilizado para aumentar a quantidade de produto amplificado final ou para aumentar a sensibilidade da técnica.
Reação em cadeia da polimerase aninhada
(nested PCR) é uma modificação da reação em cadeia da polimerase destina-se a reduzir a ligação não específica de produtos devido à amplificação de sítios de ligação de iniciadores inesperados.



Suas reações requerem dois pares de primers, um par mais externo para a 1a reação (round) e outro interno ao produto do 1a reação. A 1a reação necessita de um maior tempo de extensão devido ao maior tamanho do produto a ser amplificado, em seguida adiciona-se uma alíquota da 1 a reação, que servirá de molde na mistura (mix) da
1a reação. O produto da 1areação normalmente não é notado em corrida em gel de agarose, por outro lado o produto da 2a reação gerado em grande quantidade, sim, por isso pode ser visualizado na corrida eletroforética ou utilizado para seqüenciamento. 

Polimerase própria reação em cadeia é o processo usado para amplificar amostras de
DNA, através de uma polimerase de ADN mediada por temperatura. Os produtos podem ser usados para o seqüenciamento ou análise, e este processo é uma parte fundamental de muitos laboratórios de pesquisa genética, juntamente com aplicações em impressões digitais de DNA para análise forense e outros casos genéticos humanos. PCR convencional requer iniciadores complementares aos terminais do
ADN alvo. Um problema comum que ocorre é primers de ligação a regiões incorretas do
DNA, dando produtos inesperados.

Processo:
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O DNA alvo sofre a primeira corrida de reação em cadeia da polimerase com o primeiro conjunto de primers,a seleção de sítios de ligação de primers alternativos e similares dá uma seleção de produtos, apenas um contém a seqüência pretendida.
O produto da primeira reação é submetido a uma segunda operação com o segundo