Microscopia

Conceitos Básicos
Em um microscópio óptico de luz composto, a radiação atravessa a amostra (modo de transmissão) ou reflete (modo reflexão) a superfície de uma amostra, sendo difratada, recolhida pela lente objetiva e formando uma imagem aumentada que chega aos olhos pela lente ocular ou que chega à uma CCD.
A lente condensadora é utilizada no modo transmissão e é responsável por focalizar a luz vinda de um iluminador.
A denominação composto refere-se ao fato de que o aumento final é uma composição dos aumentos da lente objetiva e da ocular (ou CCD). O aumento final é então M = M(obj) x M(ocu). Dessa forma, se estamos usando uma lente objetiva de M(obj) = 100 X, e M(ocu) = 10 x, o aumento final é de M = 100 x 10 = 1000 x. No caso da CCD, geralmente M(ccd) = 12 x. Nesse caso, para a mesma objetiva, o aumento final seria de M = 1200x. O comprimento de onda da radiação (luz visível) é de cerca de 700 nm e é um dos fatores que define a resolução da técnica.
O poder de resolução do microscópio, considerando-se objetos pontuais, é definido por d = 0,61 λ/AN (Eq. 1), onde AN é a abertura numérica da lente objetiva, d é a distância mínima resolvida, em μm, e λ é o comprimento de onda da radiação, também em μm.
A expressão é essa também (Eq. 1) no caso de microscopia de campo claro no modo transmissão se a abertura numérica da lente condensadora for maior ou igual à abertura numérica da lente objetiva, ou AN(cond) >= AN(obj). Exemplo: se uma objetiva de 10x tem AN(obj)=0,25 e a configuração é tal que AN(cond) = 0,30, temos d = (0,61 x 0,7 μm)/0,25, d=1,71 μm. Mas se a abertura numérica da lente condensadora for menor do que a abertura numérica da lente objetiva, AN(cond) < AN(obj), é utilizada a expressão d = 0,61 λ/(AN(cond) + AN(obj) (Eq. 2). Como exemplo, se AN(obj) = 0,25 e AN(cond) = 0,20, temos d = (0,61 x 0,7 μm)/(0,20 + 0,25), d=0,95 μm. Nota-se que a resolução melhora quando AN (cond) < AN(obj), razão pela qual configuramos a lente condensadora (que possui AN