metodo henriksen derivado de ziehl

Método de Henriksen
Nos últimos anos, parasitas intestinais como: Cryptosporidium parvum, Isospora belli e os microsporídeos vêm causando doenças diarréicas graves em pacientes imunodeprimidos. Como esses parasitas podem ser de difícil identificação pelos métodos usuais de rotina, impõe-se utilização do método de coloração ácido-resistente para a sua pesquisa.
Para execução desse método, as fezes (frescas, preservadas em formol a 10% ou em SAF) deverão ser previamente concentradas pelo método de MIFC ou de acetato de etila, aumentando-se o tempo de centrifugação para 10 minutos. Fezes preservadas em PVA não apresentam bons resultados. Métodos de sedimentação pelo formol-éter ou centrífugo-flutuação com solução saturada de sacarose ou solução de Sheather também são utilizados para concentrar os oocistos.
1- Preparar um esfregaço delgado com parte do sedimento obtido após centrifugação.
2- Deixar secar a temperatura ambiente.
3- Fixar com álcool metílico por 5 minutos.
4- Deixar secar a temperatura ambiente.
5- Corar com o corante de Kinyoun (a frio), durante uma hora.
6- Lavar em água corrente.
7- Diferenciar com solução aquosa de ácido sulfúrico a 2% (30 segundos a um minuto) até que não saia mais corante da lâmina.
8- Lavar em água corrente.
9- Corar o fundo com solução de verde malaquita a 5%, por 8 minutos.
10- Lavar em água corrente e secar.
11- Examinar com objetiva de imersão.
Corante de Kinyon (solução salina de fucsina fenicada)
Solução A
Fucsina básica 1,5g
Álcool etílico a 95% (v/v) 100ml
A técnica de Ziehl-Neelsen evidencia esta ácido-álcool resistência. Segue o seguinte protocolo:

Confeccionar o esfregaço seguindo as técnicas atuais de biossegurança;
Fixar
Cobrir a lâmina com fucsina fenicada (o mordente é o ácido fénico);
Aquecer a lâmina até à emissão de vapores (é importante não deixar ferver);
Aguardar 5 a 8 minutos;
Lavar com água corrente;
Cobrir a lâmina com álcool-ácido 3% até descorar