Laboratorista

I. Introdução 1 1. Histórico .......................................................................................................................................................... 1 2. Transmissão viral 3 3. O vírus da hepatite C 3 4. O genoma do HCV 5 5. A replicação do HCV 7 6. A heterogeneidade do HCV 8 7. Os genótipos do HCV 10 8. Aspectos patológicos da hepatite C 11 8.1. Hepatite C aguda 11 8.2. Hepatite C crônica 11 8.3. Cirrose e Hepatocarcinoma 13 9. Metodologias de detecção da infecção do HCV 14 9.1. Detecção do ácido nucléico viral (RNA) do HCV no soro 14 9.2. Genotipagem 15
II. Objetivo 18
III. Materiais 19 1. Extração e Purificação de RNA Viral e Síntese de cDNA por Transcrição Reversa 19 2. Amplificação pela Técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) 20
IV. Métodos 22 1. Amostragem ................................................................................................................................................. 22 2. Extração e Purificação de rNA viral e síntese de cDNA por Transcrição Reversa ............................... 22 2.1.Extração 22 2.2. Síntese de cDNA .......................................................................................................................................22 3. Amplificação via Técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) 23 3.1. Primeiro PCR (first round) 23 3.2. Segundo PCR (Second round) ................................................................................................................. 23 4. Eletroforese de DNA ................................................................................................................................... 24 5. Hibridização Reversa (LiPA) 25
V. Resultados 26 1. Amostragem 26 2. Amplificação via Nested-PCR qualitativo 26 3. Genotipagem via LiPA 27
Genótipos principais encontrados 30
Subtipos do genótipo 1