hemoglobina glicada

UNIVERSIDADE FEEVALE
BIOQUÍMICA II

Relatório de Aulas Práticas

Determinação de Hemoglobina Glicada
Determinação de Glicemia

DETERMINAÇÃO DE HEMOGLOBINA GLICADA

PRINCÍPIO
A hemoglobina glicada (HbA1) forma-se a partir da reação entre a glicose sanguínea e o aminoácido valina N-terminal da cadeira beta da hemoglobina A, que é um processo contínuo e que abrange desde as hemácias mais jovens até as que estão em fim da vida média (120 dias, aproximadamente). Por esse motivo, a hemoglobina glicada representa a média proporcional dos níveis de glicose do organismo de um indivíduo e sua determinação por medidas quantificáveis permite inferir se tais níveis encontram-se nos limites fisiológicos ou não.
A técnica do procedimento relatado baseia-se na separação da hemoglobina glicada a partir de uma amostra de sangue, seguida de sua quantificação pela determinação da absorbância, e cálculo final de sua porcentagem em relação à hemoglobina total.

TÉCNICAS
Materiais
Os reagentes utilizados foram um Kit para detecção de hemoglobina glicada, contendo hemolisante para rompimento das hemácias, resina e solução padrão (produto liofilizado), sangue colhido com EDTA e água destilada.
Os materiais necessários foram micropipetas, ponteiras para micropipetas, pipeta graduada de 5mL, pipetador de borracha, tubos de ensaio, estantes para tubo de ensaio, homogeneizador hematológico, separador para tubo, cubetas e espectrofotômetro UV.

Procedimentos
O produto liofilizado (solução padrão) foi reconstituído com 500µL de água destilada. Em seguida, foi deixado em repouso por 30 minutos, com ocasionais homogeneizações, até obtenção de dissolução completa.
Para o preparo do hemolisado foi necessário homogeneizar a amostra, em seguida foram dispensados 500 µL do hemolisante em um tubo de ensaio aos quais foram acrescentados 100 µL de amostra. Após, o tubo foi misturado, agitado e deixado em repouso por 5 minutos.