genetica

PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DO PARANA
ESCOLA DE SAÚDE E BIOCIÊNCIAS
FARMÁCIA

EXTRAÇÃO DE DNA DE FOLHAS VEGETAIS

TOLEDO
2014

EXTRAÇÃO DE DNA DE FOLHAS VEGETAIS

Relatório de aula prática apresentado à disciplina de Genética e Biologia Molecular, do curso de Farmácia da Pontifícia Universidade Católica do Paraná.
Professor(a):

TOLEDO
2014
QUESTÕES DO PROTOCOLO

1) QUAL A FUNÇÃO DOS REAGENTES UTILIZADOS?

O tampão TE possui pH 8,0, que mantêm a integridade do DNA, evitando a ação das DNAses que possui pH 7,0 de ação ótima; O SDS 10% tem por função romper as membranas celulares para a liberação do DNA; a lavagem com clorofórmio serve para separar as proteínas do DNA, assim, o clorofórmio desnatura as proteínas que tornam-se insolúveis na fase aquosa a qual contém o material genético. O álcool isoamílico previne a formação de espuma quando a mistura é agitada, o que torna mais fácil a separação da fase orgânica e da fase aquosa. A proteína que foi desnaturada pelo tratamento com fenol e clorofórmio forma uma camada na interface das duas fases, separando-se do DNA que se mantém na fase aquosa.
A precipitação do DNA é feita por meio da utilização de etanol absoluto associado a uma solução com alta concentração de um sal catiônico. O etanol induz a transição estrutural nas moléculas de ácido, fazendo-as se agregarem, com conseqüente precipitação. A precipitação com etanol absoluto, além de concentrar o DNA, ajuda a remover resíduos de fenol e de clorofórmio presentes na amostra. O etanol a 70% é utilizado para remover resíduos de sais. Embora tanto o cloreto de sódio como o acetato de sódio e o acetato de amônio sejam eficazes na precipitação do DNA, é mais difícil remover o cloreto de sódio, em razão da sua menor solubilidade em etanol.
A água ultra-pura serve para ressuspender a amostra de DNA.

2) HOUVE SEPARAÇÃO DE DNA E RNA?

Sim, ao