DIAGNOSTICO MOLECULAR

Faculdade de Farmácia
Disciplina de Diagnóstico Molecular - 2014

1 - (1,0) Quais são as diferenças entre Northen blot, Southern blot e Western blot?
- Northern Blot é uma técnica utilizada para estudo da expressão gênica, ou seja, investigar se um dado gene de um genoma é ou não transcrito em RNA e quantificar isso.
- Southern blot é uma técnica utilizada para conferir se uma determinada sequência de DNA encontra-se ou não presente em uma amostra de DNA analisada. Isto é realizado por meio de um realce da eletroforese em gel de agarose. -Western blot é um método para detectar proteínas em um extrato de um tecido biológico. Essa técnica usa eletroforese em gel para separar as proteínas desnaturadas por massa. As proteínas são então transferidas do gel para uma membrana, onde foram usados como sonda anticorpos específicos à proteína. Como um resultado, os pesquisadores podem examinar a quantidade de proteína em uma dada amostra e comparar os níveis entre diversos grupos.
-NB utiliza RNA, SB utiliza DNA e WB utiliza proteína.

2- (2,0) Como funciona a técnica de sequenciamento automático de DNA?
O sequenciamento do DNA é uma série de processos bioquímicos tem por finalidade determinar a ordem dos nucleotídeos em uma amostra de DNA. A síntese de DNA se inicia por meio de um oligonucleotídeo, sendo continuada ao longo da seqüência do molde pela enzima DNA polimerase, incorporada aos nucleotídeos e sintetizada a nova fita.
Estão presentes nessa técnica dois tipos de marcadores nucleotídeos: os normais – dATP, dGTP, dCTP e dTTP; e os dideoxinucleotídeos – ddATP, ddGTP, ddCTP e ddTTP, sendo estes marcados com material fluorescente.
A polimerização do DNA prossegue, sendo incluídos os nucleotídeos deoxi até o momento em que a DNA polimerase, por acaso, insere um dideoxinucleotídeo, interrompendo assim a polimerização. Ao final de todo esse processo são observados fragmentos de tamanhos distintos. Essa reação é transferida para um gel onde, após o