Contraste De Fase Em Microscopia Ptica

Microscopia de contraste de fase

Microscopia de contraste de
 Contraste: diferença de iluminação entre fase amostras e os arredores ou o plano de fundo.
Transmissão = luz + fluorescência – (absorção + refração
+ reflexão)

fluorescência refração absorção

LUZ

reflexão

Microscopia de contraste de fase 

Tipos de contraste de fase

1) Positivo:
Positivo: amostra é mais escura do que o plano de fundo;
2) Negativo:
Negativo: amostra é mais clara do que o plano de fundo.


Equação

I = intensidade de luz do campo (f) ou da amostra (a).

Contraste = (If - Ia) x 100
If



Microscopia de contraste de
Tipos de amostra fase 1) Amplitude: alteram a intensidade da luz transmitida. Amostras transparentes coradas causam o mesmo efeito.
2) Fase: não absorvem luz, mas causam mudança de fase nos comprimentos de onda que a atravessam. Amostra transparente
Amostra tipo amplitude
Amostra tipo fase
Amostra tipo misto (maioria)

Microscopia de contraste de
fase
Contraste em amostra com baixo retardo de fase

Plano da imagem ocular

- Os raios não desviados são retardados cerca de ¼ de l em relação aos raios não desviados;
Lente do tubo
- a diferença de intensidade de luz objetiva não é percebida pelo olho humano
(não dá contraste).
Raios desviados

Distância focal amostra

Raios não desviados

condensador



Microscopia de contraste de fase O que o contraste de fase faz?

1) Contraste de fase positivo
- Acelera os raios não desviados em ¼ de  elevando a diferença de fase total para ½ de ;
- a amostra fica escura, circundada por halo claro, sobre um fundo mais claro (menos claro que o halo). Dá contraste.
2) Contraste de fase negativo
- Retarda os raios não desviados em ¼ de  elevando a diferença de fase total para ½ de ;
- a amostra fica clara, circundada por halo escuro, sobre um fundo mais escuro (menos escuro que o halo). Dá contraste.

Microscopia de contraste de
fase
Configuração não desviados + 90º
Não desviados objetiva Raios desviados
180º fora de