COLORAÇÃO GRAM

Coloração de Gram
Introdução
A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, álcool e fucsina básica. Essa técnica permite a separação de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinação da morfologia e do tamanho das amostras analisadas. A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias. É possível a análise de vários esfregaços por lâmina, o que facilita a comparação de espécimes clínicos. As lâminas podem ser montadas de forma permanente e preservadas como documentação.
Objetivo
Confeccionar uma lâmina com a técnica de Gram para visualizar a morfologia da bactéria Escherichia coli ao microscópio óptico.
Materiais
• Lâmina;
• Solução salina;
• Alça;
• Bico de Bunsen;
• Cultura com colônia de bactérias (Escherichia coli);
• Cristal Violeta, Lugol, Álcool, Fucsina;
• Papel higiênico;
• Microscópico.
Métodos
• Sobre a lâmina de vidro, colocou-se uma gota de solução salina. Com a alça já flambada tocou-se levemente na superfície da colônia e despejou-se o material na gota de solução salina. Deixou secar.
• Passou-se o esfregaço na chama do bico de Bunsen três vezes a fim de fixar o material.
• Posteriormente cobriu-se o esfregaço seco com o cristal violeta e deixou por um minuto.
• Lavou-se com água corrente.
• Esgotou-se a lâmina, e a cobriu com solução de lugol e deixar por um minuto.
• Esgota-se a lâmina e, mantendo a mesma inclinada, pingou-se gotas de álcool até que não se desprenda mais corante da preparação.
• Lavou-se com água corrente.
• Cobriu-se a lâmina com solução de fucsina e deixou por trinta segundos.
• Lavou-se a lâmina e a deixou secar.
• Em seguida examinou-se ao microscópio com a objetiva de imersão.