bioquimica

Fluxo da Informação Gênica e Técnicas de Biologia Molecular

1. Liste as forças que mantém a dupla hélice do DNA juntas como uma unidade estável.
2. Explique a técnica do DNA recombinante.
3. Explique como funciona a reação em cadeia da polimerase (PCR), enunciando os principais reagentes, e as condições de reação.
4. Os mRNAs de bactérias são geralmente policistrônicos (mais de um gene estrutural), isto é, cada mRNA codifica mais de uma proteína. Considere um mRNA que codifica duas proteínas e que contém uma seqüência interna não codificante. Sabendo como opera o processo de transcrição e tradução, explique por que o resultado final da tradução deste mRNA policistrônico seria duas proteínas separadas ao invés de uma única proteína mutante híbrida.
5. Um plasmídeo, pUC18, contém o gene de resistência à ampicilina (AmpR), a origem de replicação (ori) e o gene -gal (que codifica a enzima -galactosidase). Esta enzima degrada a molécula sintética X-gal, produzindo um produto azulado que cora a bactéria e suas colônias em azul. No início do gene β-gal há vários sítios de restrição únicos, alguns dos quais indicados no diagrama abaixo.

Você deseja clonar um fragmento de DNA de 1.0-kb (cortado com XbaI) no plasmídeo pUC18. Assim, você cortou o plasmídeo também com XbaI e, em seguida, misturou o plasmídeo cortado com o fragmento de 1.0-kb, ligou as duas moléculas de DNA (com a enzima DNA-ligase) e em seguida transformou essa molécula recombinante em uma bactéria.
a) Defina o que é um plasmídeo. Cite seus principais componentes.
b) O que você adicionaria ao meio de crescimento para a bactéria transformada?
c) Você espera que uma bactéria carreando o plasmídeo recombinante com o fragmento de 1.0-kb XbaI (DNA quimérico) produza coloração azul ou branca quando crescida em presença de X-gal? Explique sua resposta.
6. Todas as DNA polimerases conhecidas elongam a cadeia polinucleotídica na direção 5’ para 3’ a partir de um “primer”. In vivo este “primer”, que é