bioquimica

Introdução
A cinética enzimática favorece uma melhor compreensão do mecanismo de ação das enzimas. A relação entre a concentração de substrato e a velocidade da reação enzimática pode ser mostrada graficamente no formado XY. Com uma determinada concentração de substrato, variando de cada enzima, a Vmáx não aumenta claramente, essa enzima se encontra saturada. A concentração de substrato necessária para encontrar a metade da velocidade máxima é chamada de Km (constate de Michaelis). De acordo com o experimento realizado em sala, tem-se como objetivo a influência das concentrações da enzima e do substrato sobre a atividade enzimática, a velocidade máxima (Vmáx) e a constante de Michaelis (Km).

Metodologia

Fez-se a distribuição, descrita na tabela a seguir, de tampão acetato pH 4,5, solução de sacarose e enzima invertase, em nove tubos de ensaio, devidamente numerados.
Tab. 1: Distribuição de quantidades de reagente em cada tubo.
Reativos (ml)
Tubos

1
2
3
4
5
6
7
8
9
Água destilada
2,3
1,3
1,3
1,3
1,3
1,3
1,3
1,3
1,3
Sacarose 0,01 M
-
1,0
-
-
-
-
-
-
-
Sacarose 0,02 M
-
-
1,0
-
-
-
-
-
-
Sacarose 0,05 M
-
-
-
1,0
-
-
-
-
-
Sacarose 0,1 M
-
-
-
-
1,0
-
-
-
-
Sacarose 0,2 M
-
-
-
-
-
1,0
-
-
-
Sacarose 0,25 M
-
-
-
-
-
-
1,0
-
-
Sacarose 0,3 M
-
-
-
-
-
-
-
1,0
-
Sacarose 0,4 M
-
-
-
-
-
-
-
-
1,0
Invertase
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2

Após a adição dos reagentes, incubou-se os tubos a 55°C durante 10 minutos. Logo em seguida adicionou-se 1mL de DNS em novos tubos, Depois foi retirada alíquotas de 100 µL de cada tudo de ensaio que estava incubado a 55ºC e transferiu para os tubos contendo DNS, os mesmo foram colocados em banho de água fervente por 10 minutos, posteriormente ao resfriamento dos mesmos, adicionar 10 mL de água destilada leu-se a absorbância de cada tubo