Biologia

O que é?
Método de amplificação (de criação de múltiplas cópias de DNA) sem o uso de organismos vivos, por exemplo bactérias ou leveduras.
(esquema livro)
É aplicada principalmente quando a quantidade de DNA disponível é reduzido.
Tipos de PCR: Nested PCR: utilizado para aumentar a quantidade de produto amplificado final ou para aumentar a sensibilidade da técnica. As suas reacções requerem dois pares de primers (bases nitrogenadas ligadas com um trifosfato ; também podem ser chamados de oligonucleotídeos ou iniciadores), um par mais externo para a primeira reacção e outro mais interno ao produto da primeira reacção
(Esquema)
A 1ª reacção precisa de um maior tempo de extensão devido ao maior tamanho do produto a ser amplificado, em seguida adiciona-se uma alíquota da 1ª reacção, que servirá de molde na mistura (mix) da 1ªreação.
O produto da 1ª reacção normalmente não é notado em corrida em gel de agarose, por outro lado o produto da 2ª geração gerado em grande quantidade, por isso pode ser visualizado na corrida electroforética ou utilizado para sequenciamento. Hot Start: A reacção de PCR quando a temperatura atinge 94ºC. Esse procedimento aumenta a especialidade da PCR, pois a DNA polimerase contém um anticorpo, que se desnatura e activa a enzima ao atingir a temperatura de 94ºC. DNA polimerases que não possuem esse inibidor podem amplificar produtos indesejados (inespecificos) em temperatura ambiente.
(Esquema)

Procedimento:
É um método muito sensível de análise e por isso é realizado com muito cuidado, para evitar contaminações que possam inviabilizar out ornar erróneo o resultado. Basicamente, este processo, consiste em utilizar os mecanismos da replicação in vitro. Os cientistas simplificaram ao máximo o processo de polimerização dos moléculas.
1º- Deve-se extrair o material genético da célula ou outro material a ser estudado (exemplos: vestígios de crimes). Geralmente o material utilizado é o DNA, mas pode-se trabalhar RNA.
2º- Depois