AULA

Curso: FARMÁCIA
Disciplina: CQPFC –controle de qualidade de produtos farmacêuticos e cosméticos (C.Q. microbiológico)
Titulo da Aula: Determinação do número de microrganismos em amostras de produtos não estéreis (xarope de iodeto de potássio) utilizando método de semeadura em profundidade ou “Pour Plate”.
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OBJETIVO: ensinar ao aluno como executar uma das técnicas convencionais de teste de limites microbianos (TLM) mais utilizadas em laboratórios de Controle de Qualidade Microbiológico de produtos farmacêuticos não estéreis, cosméticos e matérias primas relacionadas.

PROCEDIMENTO:

A) Preparação da amostra e diluições seriadas decimais:

1. Transferir 1 mL da amostra para balão contendo 9 mL de solução fisiológica (dil. 10-1).
2. Homogeneizar e fazer mais duas diluições decimais subsequentes, pipetando 1 mL para 9 ml de solução fisiológica contida em tubos de ensaio (dil.10-2 e dil. 10-3).

OBS: todas as 3 diluições já contem substância inativante do conservante presente no produto testado (sob concentração previamente validada)
Normalmente as amostras contêm conservantes, a base de parabenos, que são inativados por polissorbato (tween 80, por exemplo)

B) Semeadura em profundidade:

1. Transferir 3 alíquotas de 1 mL de cada diluição preparada anteriormente (10-1, 10-2 e 10-3) para 3 placas de petri de 100 x 30mm.

2. Adicionar cerca de 15 mL de meio ágar caseína soja (TSA) fundido (T°C de  45°C) e homogeneizar DELICADAMENTE em movimentos circulares (S ou 8).

3. Repetir os procedimentos 1 e 2 para o meio ágar Sabouroud.

4. Aguardar solidificação e incubar (na posição invertida) em estufa a 35  2°C por 5 (TSA) e 7 dias (temperatura 24  2°C – Sabouroud).

5. Após esse período, retirar as placas da estufa.

6. Contar o número de colônias desenvolvidas e anotar no formulário.

7. Calcular o número de microrganismos presentes na amostra analisada utilizando diluição adequada (conforme explanado em aula teórica).