An Lise Molecular

CENTRO DE ESTUDOS SUPERIORES DE MACEIÓ – CESMAC

TÉCNICAS CONVENCIONAIS DE ANÁLISE MOLECULAR

Prof. MsC. Moezio de Vasconcellos Costa Santos Filho
Maceió - 2015

Análise Molecular

Eletroforese
→ Eletroforese em gel;
→ Eletroforese Capilar.

Técnicas de Hibridização
→ Southern Blot;
→ Northern Blot;
→ Western Blot.

Análise Molecular
Eletroforese:
→ Separação de moléculas conforme o tamanho, a forma e a carga;
→ Primeiro passo antes do Sequenciamento de DNA ou de técnicas Blot.

Componentes básicos:
→ Cuba de Eletroforese;
→ Fonte liberando carga elétrica;

Análise Molecular
→ Componentes básicos:

Análise Molecular
Eletroforese em gel de Agarose:
→ Minigéis;
→ Rede de polimerização (%);
→ Horizontais;
→ Submarinos;
→ DNA, RNA e Proteína.

Análise Molecular
Eletroforese em gel de Agarose (componentes/reagentes):
→ Amostra (extraída, amplificada, purificada);
→ Marcador de peso molecular (100pb, 50pb, 25pb);
→ Controle positivo;
→ Controle negativo;
→ Azul de bromofenol / Xileno cianol (traçadores);
→ BrEt (mutagênico);
→ Transluminador UV.
Obs.: Análise de fragmentos de maior peso molecular.

Transluminador UV

Análise Molecular
Eletroforese em gel de Agarose (quantificação - DNA extraído):

→ Amostra apenas extraídas;
→ Objetivo de quantificação não específica;
→ Teste de eficiência de extração;
→ Nível de degradação do DNA.

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Análise Molecular
Eletroforese em gel de Agarose (diagnóstico - DNA amplificado):
→ Amostra apenas amplificadas;
→ Objetivo de rastreamento de DNA específico;
→ Teste de eficiência de extração e amplificação;
→ Identificação do peso molecular pelo marcador.

“Amplificação de uma única região.”

Análise Molecular
Eletroforese em gel de Agarose (quantificação - DNA purificado):
→ Amostra purificadas;
→ Objetivo de quantificação específica e ensaio de diluição;
→ Teste obrigatório para Sequenciamento genético;
→ Comparação por intensidade das bandas com o