Tecnicas de analises

RADIOIMUNOENSAIO (RIA)

Este método é quantitativo, a reação antígeno-anticorpo é medida pela detecção de radioatividade, possui alta sensibilidade, os resultados são precisos e rápidos. Sua utilização é para quantificar hormônios, drogas, marcadores tumorais e anticorpos e antígenos em doenças parasitárias, além de serem usadas como teste de triagem do vírus da hepatite B em doadores de sangue, proteínas séricas, vitaminas e Ac. Seu principio geral consiste na quantidade de reagente marcado (antígeno ou anticorpo) que quantifica o antígeno ou anticorpo não marcado na amostra, ou seja, ocorre uma reação de competição por um receptor com uma substância a ser determinada e a mesma substância marcada radioisotopicamente. Os principais radioisótopos utilizados são: Iodo 125 ou 131, Cobalto ou Trício, no qual é usado um leitor radiométrico, anticorpos radioativos, antígenos radioativos e a amostra a ser testada. A técnica de radioimunização pode ser realizada de duas maneiras: a primeira consiste numa quantidade conhecida de antígenos marcados e antígenos da amostras, estes são misturadas e irão reagir competitivamente com uma quantidade fixa de anticorpos fixos na fase sólida. Logo após, a reação imune atinge o equilíbrio, a mistura será lavada para remover os conjugados não reativos que serão separados do complexo imune preso na fase sólida. A concentração do analito é inversamente proporcional ao sinal emitido. A segunda forma de execução da técnica baseia pelo método do sanduíche, onde um anticorpo ligado a fase sólida forma um imunocomplexo, onde o segundo anticorpo conjugado se liga ao imunocomplexo. Em seguida ocorre uma lavagem para retirar os anticorpos conjugados não reativos, sendo que a concentração do analito neste método ocorre diretamente proporcional ao sinal emitido. A sua limitação está no alto custo na elaboração do teste, não utiliza reagentes estáveis, ou seja, usa radioisótopos e trítio H3 ou I125 e existia a