SISTEMA DE ANCORAGEM DA GLICOAMILASE À SUPERFÍCIE CELULAR DE Saccharomyces cerevisiae

Sistemas do tipo “cell surface display” vêm sendo desenvolvidos para expressão de proteínas heterólogas ancoradas à superfície celular de microrganismos. Várias aplicações deste sistema foram reportadas, incluindo o emprego como biocatalizador celular, desenvolvimento de vacinas e biosorventes celulares.
A expressão de proteínas ancoradas à superfície celular de S. cerevisiae oferece mais vantagens do que os sistemas empregando outros microrganismos. Primeiro,
S. cerevisiae é um organismo seguro “GRAS” (“Generally Recognized As Safe”) empregado há muitos anos na produção de alimentos e fármacos; segundo, é de fácil manipulação genética; e, terceiro a estrutura rígida da célula torna à levedura conveniente para várias das aplicações já mencionadas. Além disso, a levedura pode ser cultivada numa alta densidade celular, em um meio de cultura barato.
Neste trabalho foi desenvolvido um sistema que permite ancoragem da proteína glicoamilase de Aspergillus awamori à superfície da parede celular da levedura Saccharomyces cerevisiae. O c-DNA codificador da glicoamilase com sua seqüência sinal de secreção foi fusionado ao fragmento do gene codificador da região C-terminal da proteína Flo1p de S. cerevisiae empregada como âncora. A fusão gênica foi clonada no vetor de expressão de S. cerevisiae pUCC e o fragmento de DNA CG*FC foi empregado na transformação genética das células. A glicoamilase recombinante foi expressa sobre o controle do promotor da fosfoglicerato quinase (PGK) de S. cerevisiae. Os transformantes de levedura foram capazes de utilizar diretamente o amido como única fonte de carbono e liberar glicose para proliferar. A atividade da glicoamilase não foi detectada no meio de cultura, porém foi detectada no sedimento de células. Conclui-se, portanto, que a atividade da glicoamilase estava associada à fração celular. Estes resultados demonstram que a glicoamilase foi ancorada, com sucesso, à parede celular das células transformantes de levedura.