relatório de reação da cadeia da polimerasi
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IntroduçãoA reação em cadeia da Polimerase é uma metodologia que pode ser executada inteiramente in vitro, sem o uso de células. A PCR possibilita a síntese de fragmento de DNA, usando a enzima DNA-polimerase, a mesma que participa da replicação do material nas células. Esta enzima sintetiza uma sequencia linear de DNA, desde que exista um iniciado, primer, que esteja ligado a uma das cadeia do DNA no ponto escolhido para o início da síntese. Os iniciadores definem a sequência a ser replicada e o resultado obtido é a amplificação de uma determinada sequência de DNA com bilhões de cópias.
Para a realização do processo utiliza-se um Termociclador, que irá variar a temperatura dentro dele fazendo com que exista um meio adequado para os reagentes trabalharem. Em um primeiro momento a temperatura vai ser aumentada, fazendo com que as fitas de DNA se separem, quebrando as pontes de hidrogênio. Esse aumento da temperatura é a forma mais adequada de separar as fitas de DNA, pois nesta reação não possui a enzima Helicase.
Esta técnica só foi possível de ser feita quando se encontrou uma DNA polimerase termoestável, ou seja, aguentava altas temperaturas. Ela é extraída da bactéria Thermos aquaticus e é conhecida como taq polimerase.
O desenvolvimento da técnica de amplificação de segmentos de DNA utilizando a PCR abriu enormes perspectivas para a análise de genes, diagnóstico de doenças genéticas e detecção de agentes infecciosos. Outras aplicações especialmente úteis para a PCR é a clonagem de um determinado fragmento de DNA, que pode ser um gene e o conhecimento do DNA codificante (cDNA) obtidos a partir de moléculas de RNA, o que permite o estudo da expressão de genes.
Existe uma técnica mais moderna atualmente que é chamada de PCR em tempo real, essa técnica possibilita o monitoramento da amplificação do material genético, quantificando-o de maneira precisa e com uma maior reprodutibilidade, porque determina valores durante a fase exponencial da reação. O