RELAT RIO FINAL Bioquim Exp

Universidade de São Paulo
Faculdade de Ciências Farmacêuticas

QBQ 0316 BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL - 2013

Relatório 2: Prática 5

GRUPO 19

Nomes: Caio César Marques dos Santos Márcia Rangel Frota Ponte Matesa Ramos de Almeida Raquel Caroline Martins de Sousa

Nº USP: 8021551 8020949 8140582 8021036

Período: Noturno
Introdução

Purificação de proteínas é uma série de processos que têm em vista o isolamento de um único tipo de proteína de uma mistura, normalmente, muito complexa. A purificação é vital para a caracterização da função, estrutura e interações de proteínas de interesse.
As etapas a serem seguidas nesse processo de purificação dependem das características físico-químicas, das propriedades biológicas, da fonte da qual a proteína será purificada e da tecnologia disponível. Normalmente, um processo de purificação é realizado em várias etapas.
Quando se realiza uma purificação é importante levar em consideração diversos fatores que influenciam na escolha das etapas a serem seguidas no processo, como por exemplo: objetivo para pureza, quantidade e rendimento, manutenção da estrutura, atividade biológica, custo para o processo e tempo. Assim, é crucial que se tenha o maior número possível de informações sobre a proteína alvo, como por exemplo, hidrofobicidade, solubilidade e afinidades.
No experimento que realizamos, utilizamos como técnica de separação a cromatografia de troca iônica. Esta técnica baseia-se no fato de que proteínas são grandes eletrólitos polivalentes e assim, em determinado pH, é muito improvável que todas as proteínas contidas em uma mistura tenham as cargas totais iguais. As cargas de uma proteína dependem das cargas de seus aminoácidos, as quais são determinadas pelo pH do meio. À medida que o pH diminui os grupos negativamente carregados são neutralizados e os positivamente carregados se tornam mais numerosos, o oposto ocorre quando o pH aumenta. Há um pH