Preparo, inoculação e semeadura em meio de cultura BHA (BHI + ágar)

1.1 Preparo de meios de cultura
Meios de cultura são associações de substâncias que permitem o cultivo de microrganismos fora do seu ambiente natural. Nas preparações dos meios de cultura todos os nutrientes devem ser dissolvidos em água para que possam ser absorvidos pelas células microbianas.
A água utilizada deve ter boa origem e composição química constante, em laboratórios geralmente utiliza-se água destilada para o preparo dos meios. Como constituintes básicos dos meios de cultura, além da água, pode-se especificar: as fontes de carbono, as fontes de nitrogênio, os sais. Em meios de cultura solidificados, além destes componentes deve-se introduzir ágar, gelatina ou sílica gel com a função específica de solidificar o meio.

1.2 Etapas de preparação de meios de cultura

Pesagem: Consiste na pesagem dos componentes do meio. O ágar geralmente é pesado separadamente, sendo o valor da pesagem em função da quantidade do meio a ser distribuído nos recipientes. Utiliza-se de 10 a 20g deste agente solidificante em pó para cada litro de solução nutriente.

Solubilização dos componentes: Adiciona-se os nutrientes a um béquer (ou outro recipiente) e dissolve-se em água. Os extratos de carne e de leveduras podem ser aquecidos ligeiramente para facilitar a solubilização. Deve-se evitar o 20 uso de fogo direto e prolongado para não haver queima do material e consequente escurecimento do meio. O ágar não é solúvel a frio, devendo se necessário ser solubilizado em um banho-maria ou em autoclave a vapor fluente.

Ajuste do pH nos meios: deve-se deixar resfriar ao máximo os meio líquidos, antes de acertar o pH. No caso dos meios solidificados ajustar na menor temperatura em que não haja solidificação. São empregadas para ajuste do pH soluções de hidróxido de sódio ou ácido clorídrico a 0,1N conforme o caso. Na maioria dos casos pode-se verificar o pH através do uso de um papel de tornassol. Em meios solidificados, o pH ácido só deverá ser ajustado depois da