Pirosenquenciamento

Sequencing Experiences for Life
Bem vindos ao blog Sequencing Experiences for Life. Um canal de comunicação na web para discutir e compartilhar experiências em sequenciamento. Problemas, idéias, sugestões, fique a vontade para fazer seus comentários e enviar suas sugestões.
Life Technologies
Eletroforese Capilar
Ion Torrent
The SOLiD System
Análise de metilação por sequenciamento

A metilação do DNA é um dos mecanismos mais importantes para a regulação da expressão gênica. Perfis de metilação estão associados não apenas aos diferentes tipos celulares e tecidos e à idade do organismo, mas também às condiçoes fisiológicas deste organismo.
As regiões metiladas geralmente estão associadas as reigões promotoras dos genes, formando domínios que são conhecidos como ilhas CpG. Essas ilhas, qaundo metiladas, promovem o silenciamento gênico. 
A metodologia tradicional para análise de regiões metiladas envolve o tratamento do DNA com bissulfito, que promove a conversão de todas as citosinas não metiladas em uracilas. A identificação das citosinas metiladas e não metiladas nos sítios CpG pode então ser realizada por PCR Metilação-Específica, ou, mais frequentemente, por sequenciamento. O nível de metilação das regiões genômicas de interesse também pode ser determinado por análise de fragmentos ou através da construção de uma curva de dissociação (HRM).

O methylSEQr™ Bisulfite Conversion Kit é uma excelente opção para conversão do DNA por bissulfito.
Existem outras abordagens que podem ser utilizadas, como por exemplo a seleção de regiões metiladas através do uso de kits capazes de capturar essas regiões, como por exemplo o MethylMiner™ Methylated DNA Enrichment Kit. As regiões capturadas podem, posteriormente, ser analisadas de diversas maneiras, incluindo sequenciamento e análise de fragmentos.
O desenho dos primes para a análise de metilação é um dos passos mais críticos da metodologia, tanto quando se pretende analisar a metilação pelos métodos