metodo de dosagem

1)Introdução As proteínas são as moléculas orgânicas mais abundantes e importantes nas células e perfazem 50% ou mais de seu peso seco. São encontradas em todasas partes de todas as células, uma vez que são fundamentais sob todos osaspectos da estrutura e função celulares. Existem muitas espécies diferentesde proteínas, cada uma especializada para uma função biológica diversa. Alémdisso, a maior parte da informação genética é expressa pelas proteínas.
Pertencem à classe dos peptídeos, pois são formadas por aminoácidosligados entre si por ligações peptídicas. Uma ligação peptídica é a união dogrupo amino (-NH2) de um aminoácido com o grupo carboxila (-COOH) deoutro aminoácido, através da formação de uma amida.
O princípio da técnica de dosagem de proteínas é baseado na adição de reagentes químicos nas amostras, ocorrendo uma mudança de coloração.Esta mudança de cor é medida com um espectrofotômetro ou leitor de microplaca. Após, os valores obtidos são comparados com uma curva padrão com valores de concentrações já conhecidos.
Existem vários métodos de dosagem de proteínas, todos possuem suas vantagens e limitações, dependendo do tipo de proteína a ser pesquisada, dos componentes químicos contidos no tampão ou do equivalente de proteína disponível para o ensaio.
Um dos metodos é o Bradford. É um metodo simples, preciso e rápido por isso mais indicado para adetecção e quantificação de proteínas solubilizadas em meios semdetergentes.O método requer poucas etapas de misturas, não necessita deaquecimento e possui uma grande estabilidade colorimétrica, com pouca ounenhuma interferência de cátions como sódio ou potássio.O reagente de Bradford contém como seu principal componente o coranteCoomassie Brilliant Blue G-250 em solução ácida, este ao ligar-se às proteínas,tem a sua absorbância alterada de 465nm para 595nm. Esta interação entre ocorante Coomassie com a proteína, estabiliza a forma aniônica do corante,causando uma visível mudança de coloração