memorial descritivo

Princípio do Método
Amostras em sangue seco em papel filtro (S&S903) são eluídas na microplaca que está recoberta com anticorpos monoclonais. Na primeira incubação os anticorpos presentes na amostra eluída são capturados pelos presentes na placa. Após lavar todos os outros componentes não ligantes da amostra, em uma segunda incubação, as imunoglobulinas ligadas são detectadas pela adição do antígeno purificado, complexados a anticorpos monoclonais específicos marcados com peroxidase. O complexo capturado na fase sólida, agindo na mistura substrato/cromógeno, produz um sinal óptico proporcional à quantidade de anticorpos presentes na amostra. Este sinal óptico é captado em filtro azul de 450 nm, utilizando o filtro 620 nm como referência. Caso a amostra apresente fatores reumatóides e anticorpos anti-nucleares, estes não interferem no princípio do método.

Tampão de Eluição  Solução protéica tamponada com conservantes.

Procedimento
1. Permitir que reagentes e amostras atinjam a temperatura ambiente;
2. Picotar um disco de 3mm (1/8”) das amostras de papel filtro e controles na microplaca conforme o esquema de placa abaixo sugerido. Caso sejam usados controles internos, os mesmos deverão ser dispensados entre as posições indicadas em “AM”;

3. Pipetar 100 µL do Tampão de eluição nas respectivas amostras e controles picotados;
4. Cobrir as folhas com tiras adesivas, agitar por 10 minutos;
5. Incubar por 40 min a 37°C;
6. Após a incubação, retirar os picotes por inversão. As amostras remanescentes devem ser retiradas com o auxílio de uma garrafa lavadora (pisseta) contendo solução de lavagem, ou com uma agulha para cada amostra;
7. Segue o procedimento do Kit a partir da adição do conjugado.