Hjytdhgj

Escola Superior de Saúde do Vale de Sousa
Licenciatura em Enfermagem 1º ano

Espectrofotometria
Determinação da concentração de proteína no plasma pelo método do Biureto
Bioquímica Geral

OBJECTIVOS:

O objetivo deste trabalho é determinar a concentração de proteínas no plasma pelo método colorimétrico do biureto.
A reação do biureto funciona como indicador das ligações peptídicas existentes, e esta só ocorre quando existem pelo menos três aminoácidos numa cadeia peptídica.
Estas cadeias peptídicas quando reagem com o CuSO4 na presença de NaOH dão origem a uma solução de cor violeta.
Das substâncias presentes em sistemas biológicos, as proteínas são geralmente as únicas que dão uma reação positiva, embora existam várias substâncias que interfiram na reação.
Recorre-se a este método porque as proteínas não absorvem significativamente na região do visível do espectro, mas formam um complexo corado quando reagem com o reagente do biureto, o que permite efectuar facilmente a sua quantificação, utilizando um espectrofotómetro vulgar.

RESULTADOS
Tabela 1: Valores da densidade óptica (D.O.) dos tubos de 1 a 8 para a construção da recta padrão e determinação da massa das proteínas dos tubos 5 a 8. Tubo
Albumina 0,4% (m/v)/ml | D.O (densidade otica) (540nm) | mproteina
(calculada /mg) | 1 | 0 | 0 | 2 | 0,077 | 2 | 3 | 0,163 | 4 | 4 | 0,322 | 8 |

Tabela 2: Determinação da massa das proteínas dos tubos 5 a 8. Tubo
Plasma diluído 10X/ml | D.O (densidade otica) (540nm) | mproteina
(calculada /mg) | 5 | 0,129 | 3,22 | 6 | 0,130 | 3,24 | 7 | 0,250 | 6,21 | 8 | 0,248 | 6,16 |

Gráfico 1: Recta padrão obtida da densidade óptica versus quantidade de proteínas para os tubos de 1 a 4 a 540 nm. (para determinação do declive e posteriormente para calcular concentração de proteínas nos tubos de 5 a 8). Em anexo será colocado o gráfico em papel milimétrico.
CÁLCULOS
Cálculo da concentração de proteínas dos tubos 5 a 8 usando o