Harpagophytum procumbens no tratamento de osteoartrite

1. Materiais e métodos

1.1 Materiais
O material utilizado no estudo é o extrato hidroalcoólico bruto (seco) das raízes secundárias de H. procumbens, contendo 1,78% de harpagosídeos, com certificado de procedência e atividade.
1.2 Fracionamento do extrato
O fracionamento do extrato foi feito através de cromatografia “flash”, utilizando coluna de vidro de 13,5cm x 2,0cm, contendo 14g de sílica gel (200 – 400 mm Merck) com gradiente de eluição conforme (Zarate et al., 1992)e por CCPD (Huang et al., 2006), conforme representação no fluxograma.

A coluna permaneceu sobre vácuo, sendo que os eluentes (CHCl3 e MeOH) foram adicionados lentamente, na quantidade de 100ml, conforme o procedimento descrito por (Huang et al. 2006) nas proporções descritas na tabela a seguir com os rendimentos obtidos:

O monitoramento foi feito por cromatografia de camada delgada comparativa (Zarate et al., 1992) utilizando cromatoplacas de alumínio, recobertas com sílica gel 60 F 254 (Merck), eluídas com a mistura CHCl3:MeOH (75:25 v/v), observadas sob luz UV com ondas no comprimento de 254 e 366 nm, sendo reveladas com vanilina sulfúrica 3% em etanol, um revelador que cora os irídóides (Chantre et al., 2000). Por fim foram fotografadas em sistema Camag Reprostar 3 a 256 e 366 nm e sob luz branca.O resultado das 12 frações está representado nas imagens a seguir:

As frações de F5 a F12 foram reunidas e alíquotas de cinco µl foram aplicadas nas placas cromatográficas de sílica gel 60 P256 (Merck) com 1 mm de espessura, eluídas em CHCl3:MeOH (75:25 v/v) e visualizadas em câmara de UV a 254 nm e 366 nm, para determinar onde ficaram as áreas de absorção. As cinco sub-frações (G0 – G4) obtidas foram eluídas da sílica com metanol e o solvente eliminado em evaporador relatório, pesadas e armazenadas para análise.

As frações de 5 a 12 obtidas por cromatografia flash e as frações G1, G2 e G3 obtidas pela CCDP ricas em irinóides foram submetidas à cromatografia líquida de alta