GRAM

A técnica de coloração de Gram consiste numa série de etapas, desde a obtenção do esfregaço até a finalização da coloração. Neste relatório vamos abordar as diferenças de coloração em bactérias gram-positivas e bactérias gram-negativas. Porque as gram-positiva coram de azul-violeta e as gram-negativas de vermelho.
A técnica é baseada na capacidade das paredes celulares das bactérias Gram-positivas de reterem o corante violeta no seu citoplasma durante o tratamento feito com álcool que as paredes celulares das gram-negativas não fazem. O método consiste em tratar uma amostra de uma cultura bacteriana crescida em meio sólido ou líquido, com um corante primário, o cristal violeta, seguido de tratamento com o lugol. Nesse primeiro processo tanto bactérias Gram-positivas quanto Gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus citoplasmas. Segue-se um tratamento com um solvente orgânico, o álcool.
O solvente dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos poros do peptídeoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante primário é retido e as células permanecem coradas. A retenção ou não do corante primário é, portanto, dependente das propriedades físicas e químicas das paredes celulares bacterianas tais como espessura, densidade, porosidade e integridade.
Em seguida, a amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina básica. Esse processo irá corar as bactérias gram-negativas, pois as mesmas não estão coradas. As bactérias Gram-negativas com parede celular composta predominantemente por ácidos graxos (lipopolissacarídeos e lipoproteínas), perdem o complexo iodo-pararosanilina, são incapazes de reter o