GD 2 Biomol 2013 VETERANOS

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

BIOLOGIA MOLECULAR
GD 2 Biologia Molecular Noturno 2013/1 – Grupo 5

Bruna Daiany Vieira
Caio Henrique Gaspar
Luana da Silva Cruz
Marcela Aparecida Barboza
Mayara Roncante Lima

Maio de 2013.
Questões do GD 2, respostas baseadas nas apresentações de todos os grupos, sendo que a questão 5 é a que coube a este grupo fazer.

Questão 1:
Objetivo: caracterizar a mudança da expressão gênica no cérebro sob efeito de estresse.
Objetivos específicos:
a) Submeter camundongos a tratamento de estresse por cinco dias, aprisionando-o por duas horas todos os dias dentro de tubos Falcon 50 ml.
b) Isolar o hipocampo desses animais e de animais controle e isolar mRNA
c) Gerar bibliotecas de clones de cDNA e produzir 10 mil ESTs de cada biblioteca (apenas EST 5’)
d) Verificar as ESTs que formam clusters por meio de um Blast de todas contra todas e usar o software PHRAP para gerar contings de cada clusters
e) Anotar esses contings e os singlets (as ESTs que não agruparam em contings) com o software BLAST pesquisando homologia em banco de dados
f) Selecionar genes “que foram anotados” e que tenham frequências diferentes nas duas bibliotecas (estresse e controle)
g) Validar a expressão diferencial desses genes com experimentos
- Definir EST 5’ e EST 3’; Haverá EST que não é homologa a nenhum gene conhecido?; É necessário conhecer o genoma do organismo em estudo?; Identificar pontos fracos do projeto; Comparar com os grupos 2 e 3.

- Definir EST 5’ e EST 3’:
EST (Expressed Sequence Tag): é uma sequência gênica parcial derivada de um clone de cDNA que fornece uma “etiqueta para um gene”. As ESTs são únicas a um cDNA particular e eles correspondem a genes específicos no genoma. As ESTs podem ser usadas na identificação de genes desconhecidos e mapear sua posição no genoma. cDNA: é uma molécula de DNA de fita simples, sem íntrons, produzido a partir de um mRNA (obtido pela transcriptase reversa). Recebe esse nome porque devido a sua construção