Extração do DNA de Pinus taeda para posterior avaliação filogenética

Objetivo: O presente estudo teve como objetivo realizar extrações do DNA de amostras de Pinus Taeda. Metodologia: 123 matrizes de P. taeda, pertencentes à empresa Gerdau Florestal S/A, selecionadas fenotipicamente com base nas características de interesse, tiveram suas acículas coletadas, devidamente identificadas, acondicionadas em recipiente contendo nitrogênio liquido e posteriormente, armazenadas em freezer -80°C até o momento da extração. O protocolo utilizado para extração foi baseado no método de DOYL & DOYLE. Sendo utilizadas 3 acículas de cada amostra, que foram maceradas a um pó, na presença de nitrogênio liquido. Após o processo de extração a qualidade e integridade das amostras de DNA foram avaliadas por eletroforese em gel de agarose 0,8% (m/v), em tampão TAE 1x (Tris-Acetato-EDTA), previamente corado com brometo de etídeo (0,2mg/ml) e visualizado sob luz ultravioleta. E a densidade óptica foi mensurada em espectrofotômetro na proporção de 5:95 (v/v). Resultados: As amostras aFpresentaram diferenças quanto a quantidade e qualidade do DNA obtido, sendo possível observar no gel de agarose diferenças entre a nitidez e intensidade das bandas geradas pelas amostras. As concentrações de DNA obtidas por espectrofotometria variaram de 3,8 a 430,0, valores acima de 10 indicaram quantidade de DNA adequada para dar continuidade aos procedimentos. A ausência de bandas e a baixa concentração (< 10) foram determinantes para que fosse repetido o processo de extração de algumas amostras, um total de 9 repetições, resultando no aparecimento de bandas, e maiores concentrações. Conclusão: A extração de DNA de P.taeda, resultou na obtenção de amostras DNA de boa qualidade e integridade, com menos de 10% de amostras inadequadas, que após nova extração apresentaram-se com qualidade e quantidade satisfatória. Os DNAs extraídos serão posteriormente utilizados no processo de PCR, para avaliação do grau de parentesco entre as matrizes.