Extração de DNA da Planta coroa-de cristo

Independente do tipo de estudo molecular, as preparações de DNA devem produzir amostras puras suficientes para não inibir os tratamentos enzimáticos. Alguns fatos devem ser considerados para que se tenha um DNA de boa qualidade sendo extraído, como por exemplo, as paredes celulares devem ser rompidas com o objetivo de liberar os constituintes celulares, devem ser protegidos da ação de DNAses que pode degradar o DNA, entre outros. Ou seja, o DNA deve estar íntegro e livre de impurezas. O método de extração de DNA mais utilizado para diferentes espécies vegetais é baseado no uso do detergente CTAB.O CTAB é um detergente catiônico que tem propriedade de precipitar ácidos nucléicos e polissacarídeos ácidos em soluções de baixa concentração iônica. O mesmo também possui a função de lizar as enzimas. Os componentes do tampão CTAB são: NaCl (Cloreto de sódio) 5M que auxilia a precipitação do DNA atuando no equilíbrio iônico do tampão; Tris HCl 1M e pH 8,0 que é um agente tamponante (pH 7,5) para evitar que o DNA seja degradado por enzimas; EDTA 0,5 mM e pH 8,5 que funciona como ácido orgânico e um agente quelante (tira metais); β-mercaptoetanol que é um agente anti-oxidante que ajuda a eliminar proteínas. Esse estudo, foi realizado com base na amostra aleatória da planta popularmente conhecida como Coroa-de-Cristo, em que seu nome científico é Euphorbiamilii, pertencente a família Euphorbiaceae uma planta considerada tóxica que foi distribuída juntamente com diversos outros tipos de planta para os grupos, presentes no laboratório de Biologia Molecular da UFCG CES-Cuité. A aula prática realizada na UFCG CES-Cuité teve como objetivo a extração do DNA da planta Coroa-De-Cristo utilizando o método CTAB.
MATERIAIS E MÉTODOS

• ÁGUA DESTILADA;
• CADINHO;
• PISTILO;
• EPPENDORF;
• VÓRTEX;
• CAPELA DE EXAUSTÃO;
• PIPETA;
• BANHO-MARIA;
• PONTEIRA;
• CENTRÍFUGA;
• GELADEIRA;
• EPIs;
• TAMPÃO;
• CLOROFIL;
• β-MERCAPTOETANOL;
• PVP;
• ISOPROPANOL;
• ETOH (70%);