enfermagem

Aula Prática de Biologia
Laboratório de Ciências da Natureza e Matemática
E. E. M. Cel. Alfredo Silvano
Profa.: Jéssica Ximenes

Extração do DNA Vegetal

MATERIAL • 1/4 de cebola grande e/ou 1/3 de banana e/ou 1 morango;
• 01 faca de cozinha;
• 01 béquer;
• 01 erlenmeyer;
• 01 proveta;
• 01 filtro ou peneira;
• 01 conj. grau e pistilo;
• 01 espátula;
• Água quente (60º C);
• 40 mL de álcool etílico 90º gelado (a cerca de 10º C);
• 20 mL de solução de lise (água - 20 ml + detergente - 10 ml + sal de cozinha – uma ponta da espátula);

PROCEDIMENTO
• Retirar a casca da cebola e cortá-la em pedaços bem pequenos. No caso da banana fazer o mesmo. Quanto ao morango retirar apenas as folhas do ápice e cortar em pedaços;
• Macerar os pedaços com auxílio do grau e pistilo até formar uma pasta. Se necessário acrescentar uma quantidade mínima de água;
• Com o auxílio da colher colocar o macerado na peneira apoiada sobre o béquer e pressionar contra a malha, de modo a peneirar o material;
• Usar erlenmeyer para preparar solução lise e adicionar em seguida ao mesmo frasco 20 mL do caldo peneirado;
• Movimentar o frasco suavemente, evitando a formação de espuma, até que o caldo se misture com a solução de lise;
• Colocar o tubo na vasilha com água fervendo e deixar em banho-maria por 15 minutos. Em uma única vasilha deverão ser colocados os tubos de todos os grupos;
• Retirar o frasco da água quente e adicionar lentamente, com o auxílio da proveta, 20 mL de álcool etílico gelado, deixando escorrer pela parede do erlemeyer;
• Observar o aparecimento do aglomerado de DNA como uma “nuvem” branca na fase alcoólica. Caso ainda não seja possível a visualização, misture delicadamente a amostra e aguarde 5 minutos;
• Com o auxílio da colher de chá, retirar o aglomerado filamentoso de DNA da solução.

QUESTÕES

1. Por que o material precisa ser macerado para isolar o DNA?
2. Qual o papel do detergente