COLORAÇÃO DE GRAM E ZIEHL-NEELSEN

Título: Coloração de Gram e Ziehl-Neelsen
Objetivo: Realizar coloração de lâminas através das técnicas de coloração de Gram e Ziehl Neelsen e observar no microscópio os microorganismos.
Materiais e Métodos:
 Lâmina contendo esfregaço de bactérias;
 Pinça;
 Bico de Bunsen;
 Algodão;
 Álcool 70%;
 Cristal Violeta;
 Lugol;
 Fucsina;
 Fucsina Fenicada;
 Álcool – Ácido;
 Azul de Metileno;
 Microscópio Óptico.

 Procedimento para coloração de Gram:

1. Fixamos a lâmina contendo esfregaço, passando-a três vezes sobre a chama do bico de Bunsen.
2. Em seguida cobrimos o esfregaço pingando gotas de cristal violeta e deixamos agir por 1 minuto.
3. Lavamos a lâmina em água corrente.
4. Cobrimos a lâmina com lugol e deixamos agir por 1 minuto.
5. Escorremos todo o lugol e lavamos em água corrente.
6. Fizemos a descoloração da lâmina, aplicando álcool sobre a lâmina.
7. Lavamos a lâmina em água corrente.
8. Cobrimos toda a lâmina com fucsina e deixamos corar por aproximadamente 30 segundos.
9. Lavamos a lâmina em água corrente.
10. Deixamos a lâmina secar sobre um papel absorvente.
11. Observamos a lâmina no microscópio.

 Procedimento para coloração de Ziehl-Neelsen:

1. Fixamos a lâmina contendo esfregaço, passando-a cinco vezes sobre a chama do bico de Bunsen.
2. Cobrimos a lâmina com fucsina fenicada.
3. Enrolamos algodão embebido com álcool 70% em uma pinça, colocamos fogo para aquecermos a lâmina até a emissão de vapores por cerca de 5 minutos.
4. Lavamos a lâmina em água corrente.
5. Fizemos a descoloração da lâmina, aplicando álcool-ácido sobre a lâmina.
6. Lavamos a lâmina em água corrente.
7. Cobrimos a lâmina com azul de metileno e deixamos agir por 2 minutos.
8. Lavamos a lâmina em água corrente.
9. Deixamos a lâmina secar sobre um papel absorvente.
10. Observamos a lâmina no microscópio.

Resultados:

 Para coloração de Gram:

Obtivemos o seguinte resultado, em uma lâmina observamos a presença de