China Blue

Ano Letivo: 2014
Disciplina: Microbiologia
Tema: Coloração de Gram
Amostras: Activia (Bifidobacterium animalis), Caldo de Cana, Yakult, Placa sem nome.
Nome:
Coloração de Gram
1. Introdução A técnica de Gram ou coloração de Gram é uma técnica de coloração de preparações de amostras para observação ao microscópio, utilizada para corar diferencialmente microorganismos com base na composição química e integridade da sua parede celular. Consoante a cor que adquirem, são classificados em gram-positivos (roxo) ou gram-negativos (vermelho). Tal método se deve ao médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram. Esta técnica teve por objetivos determinar e interpretar o mecanismo de reação de Gram, como um método de coloração diferencial.
O método consiste no tratamento de uma amostra bacteriana crescida em meio sólido ou líquido, com um corante primário, o cristal violeta, seguido de tratamento com um fixador, o lugol. Tanto bactérias Gram-positivas quanto Gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus citoplasmas. Segue-se um tratamento com um solvente orgânico, o etanol-acetona. O solvente dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos poros do peptideoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante primário é retido e as células permanecem coradas. Em seguida, a amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina básica. Ao microscópio, as células Gram-positivas aparecerão coradas em violeta escuro e as Gram-negativas em vermelho.
Desta forma, a diferente estrutural da parede bacteriana e, em particular a espessura da camada de peptideoglicano, é a responsável pelo diferente comportamento das