biologia

FIG 1: Esquema de diluição da técnica das diluições sucessivas

2. Concentração Celular e Contagem de Células Viáveis de Leveduras pelo Uso da Câmara de Neubauer
A contagem direta por microscópio, é a mais rápida, e é levada a efeito com a contagem de organismos num volume conhecido da cultura. Esta enumeração é feita com o auxílio de lâminas espessas, conhecidas como câmaras de contagem. As mais comuns são as de Petroff-Hausser, Neubauer e as de Helber. estas câmaras apresentam uma área reticulada, com pequenos quadrados de superfície conhecida. Fazendo parte do conjunto, existe uma lamínula que recobre os pequenos quadrados, de modo que a altura destes à lamínula é conhecida.

No nosso experimento, as leveduras serão contadas numa câmara de Neubauer, que apresenta uma área dividida em quadrados com 1/400mm2; a câmara é coberta com uma lamínula, deixando uma altura de 1/10mm, i.é., de cada quadrado à lamínula. Assim sendo o volume que fica acima de cada quadrado é de 1/4000 mm3.

Esta contagem inclui organismos viáveis e mortos, sendo denominada de contagem total de células.

Este método de contagem direta, tem a vantagem de fornecer um resultado quase imediato, no entanto tem a desvantagem de não se ter a distinção entre células vivas e mortas.

Material

- Microrganismo: Cultura de Saccharomyces cervisiae

- Reagentes: Solução salina fisiológica (0,85% NaCl)

-Equipamentos:Microscópio ótico comum, Câmara de contagem de Neubauer

Bico de Bunsen

- Diversos: Pipeta Pasteur

Procedimento Experimental
Pipeta 1ml da amostra de suspensão celular para um tubo de ensaio;

Adicionar 1ml de corante celular (solução 0,02% de azul de metileno em solução a 2% de citrato de sódio)

Homogeneizar e deixar em repouso por 15 minutos

Adicionar com uma pipeta Pasteur ou similar, uma gota da suspensão da cultura de levedura sobre a área reticulada da câmara;

Ajustar a câmara à platina do microscópio;

Colocar a lamínula sobre a gota.