BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA MEDICINA FUNDAMENTOS TE RICOS E METODOL GICIOAS

BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA À
MEDICINA: FUNDAMENTOS TEÓRICOS E
METODOLÓGICOS

Profa. Dra. Nancy Amaral Rebouças

São Paulo, fevereiro 2008

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Referências utilizadas para preparação dos roteiros e elaboração das discussão sobre os métodos:

- Current Protocols in Molecular Biology
F.M. Ausubel e cols - Editora: John Wiley & Sons, Inc.
Atualizações bimensais
- Molecular Cloning - A Laboratory Manual
Sambrook - Russel

3a. Ed. - Editora: Cold Spring Harbor

Laboratory Press – 2001
Imprescindível num laboratório de Biologia Molecular
Aqui voce pode encontrar todos os protocolos necessários, com excelentes explicações.

- PCR Primer - A Laboratory Manual
C.W.Dieffenbach
G.S.Dveksler
Editora: Cold Spring Harbor Laboratory Press – 2a. edição - 2003

- Nucleic Acid Hybridization - A Pratical Approach
B.D.Hames & S.J. Higgins
Editora: IRL Press – 1991

- PCR - The Polymerase Chain Reaction
K.B. Mullis
F.Ferré
R.
A. Gibbs

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Revisado por James D. Watson
Editora: Birkhauser 1994

- PCR Applications – Protocols for Functional Genomic
Michael A. Innis
Davod H. Gelfand
John J. Sninsky
Academic Press – 1999.

- PCR – The Basics from Background to Bench
M.J. McPherson
S.G. Moller
Bios – Spring Verlag – 2000.

- PCR 2 – A Pratical Approach
M.J. McPherson
B.D. Hames
G.R. Taylor
PAS – A Pratical Approach Series
IRL Press – 1995.

- PCR Protocols
J. M. S. Bartlett
D. Stirling
Human Press – 2ª. Ed.- 2003

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Soluções Básicas Utilizadas no Laboratório de Biologia
Molecular:
Tris.HCl [tris(hydroxymethyl)aminomethane] - 1M
Dissolva 121g de Tris Base em 800 ml de água MiliQ
Ajuste o ph desejado com HCl concentrado
Adicione água até 1L
Autoclave
Cerca de 70 ml de HCl são necessários para pH de 7,4 ; e cerca de 42 ml para pH de 8,0.
Nota importante: O pH dos tampões com Tris muda significativamente com a temperatura, caindo cerca de 0,028 U para elevação de cada 1oC. O pH das soluções tamponadas com Tris deve ser ajustado na temperatura na qual as soluções serão usadas. Como o pK do