AULA PRÁTICA - ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DO SOLO

AULA PRÁTICA 8
Isolamento de microrganismos do solo: Método de diluição em placa
Objetivo: Permitir ao aluno um aperfeiçoamento da técnica de diluição seriada e mostrar as diferenças visíveis no desenvolvimento dos microrganismos (fungos e bactérias) após cada etapa da diluição. Material:
Agitador de tubos
Álcool
Alça de Drigalski
Amostra de solo
Balança analítica
Becker
Lamparina
Meios de cultura Martin, NA e Amido Caseína + agar(AC)
Tubos de ensaio contendo solução salina
Pipetas
Placas de Petri contendo meio de cultura estéril
Ponteiras estéreis
Procedimento 1: Diluição de solo
1. Identificar as placas de Petri (data, nome do grupo, concentração)
2.Retirar o tampão de um erlenmeyer esterilizado com 90 ml de Solução salina (85%)
3.Colocar 10 g de solo no erlenmeyer
4.Fechar o erlenmeyer com o tampão, agitando-se para homogeneizar a solução de solo
5.Retirar 1 ml da solução de solo do erlenmeyer
6.Verter este 1 ml de solução de solo do erlenmeyer em um primeiro tubo (1), marcar 1:10 (10 -1)
7.Agitar o tubo de ensaio (1) e retirar 1 ml da solução de solo
8.Verter este 1 ml de solução de solo do primeiro tubo em um segundo tubo, marcar 1:100 (10 -2)
9.Agitar o tubo de ensaio (2) e retirar 1 ml da solução de solo
10.Verter este 1 ml de solução de solo do segundo tubo em um terceiro tubo, marcar 1:1000 (10 -3)
11. Agitar o tubo de ensaio (3) e retirar 1 ml da solução de solo
12.Verter este 1 ml de solução de solo do terceiro tubo em um quarto tubo, marcar 1:10000 (10 -4)
13. Agitar o tubo de ensaio (4) e retirar 1 ml da solução de solo
14.Verter este 1 ml de solução de solo do quarto tubo em um quinto tubo, marcar 1:100000 (10 -5)
Procedimento 2: Plaqueamento
Para cada tubo de ensaio (cada diluição) plaquear duas placas de cada meio, sendo Martin, NA e AC.
1. Agitar o tubo (1) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a solução sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma alça de Drigalski flambada. (Placa 1)