Análise proteômica da fase leveduriforme do fungo patogênico Paracoccidioides sp durante a privação de Nitrogênio

Análise proteômica da fase leveduriforme do fungo patogênico Paracoccidioides sp durante a privação de Nitrogênio.
Vanessa Rafaela milhomem CRUZ-LEITE1; Clayton Luiz BORGES1
1Universidade Federal de Goiás – Laboratório de Biologia Molecular ICB II E-mail: [e-mail]
O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da doença paracoccidioidomicose (PCM), termodimórfico, com capacidade de transitar da forma saprobiótica para a forma de levedura à uma temperatura em torno de 37°C. O metabolismo de nitrogênio é essencial para o crescimento e adaptação do fungo em tecido hospedeiro, onde vias dependentes de nitrogênio possuem estreita relação com a patogenicidade. Organismos patogênicos possuem um sistema regulatório quando a disponibilidade de nitrogênio no ambiente é limitante ocasionando a expressão de genes necessária para a captação do nutriente quando fontes preferenciais como a glutamina e amônia estão escassas. Esse processo regulatório compõe um complexo sistema no processo infeccioso. Este trabalho tem o objetivo de identificar proteínas reguladas pela privação de nitrogênio, onde o fungo patogênico Pb01-like foi analisado quanto sua resposta proteômica. O fungo foi cultivado em meio fava-netto sólido e líquido e as células leveduriformes foram transferidas para o meio mínimo McVeigh & Morton (MMcM) controle e tratado, sem fontes de nitrogênio. O ponto de extração foi de 3 dias em meio fava-netto sólido, 48 horas em fava-netto líquido e 6 horas em meio mínimo. Após essa etapa as células foram centrifugadas e lisadas por um disruptor de células Mini Beadbeater, o sobrenadante com as proteínas citoplasmáticas dos dois tratamentos foram quantificados e o perfil qualitativo dos extratos analisado por SDS-PAGE. Os extratos proteicos totais foram submetidos à digestão tríptica para LC-MSE. As amostras foram identificadas através do Nano UPLC-MSE e as tabelas com as proteínas estão em