ytytytyt

Padrão de Polimorfismo
- ai, a2 e a3 são sítios específicos para a enzima
O individuo doente vai perder o A2, apenas o normal, e este vai ter então o fragmento espeficico, que auando marcr com a sonda, a mutação vai evitar a clivagem desteentão na hora que hibridizar o fragmento para essa região vai ser observdo uma banda maior em relação ao individuo saudável.
- nem sempre uma mutação acontece em um sítio específico para uma enzima de restrição, tendo padrões de polimorfismos diferentes.

Eletroforese com DNA desnaturado
Desnatura-se tanto o dna normal, como o mutado com o hidróxido de sódio, pq quando o dna esta desnaturado a corrida vai dar uma separação maior das duas moléculas visualizando pequenas diferenças como a mutação pontual

Marcadores com sonda
Marca-se so o dna ormal com uma sonda na posição 5’ ou uma substancia radioativa. Dai coloca-se no mesmo tubo o dna mutante e normal e se faz um tratamento com hidróxido de sódi (hidroxolamina) ( essas substancias sção capazes de modificar nucleosideos não pareados) a piteridina vai clivar a região da mutação, e depois vai correr o gel.
A banda menor é porque houve clivagem.
Mutação pontual : uma única mutação, uma única troca de um nucleotídeo.

Pcr : reaizada para determinar marcadores de determinadas doenças.
RT-qPCR ( transcriptase reversa quantitativa)
Quantificar o numero de moléculas de forma espefícica, dizendo se o dna esta presente e em que quantidade esta presente, diferente do pcr comum inicialmente uma molécula de RNA total , sendo transfoermado em trna, e forma o cDNA, e utiliza-se primers específicos, específicos para o diagnóstico. Uma sonda chamada taqman (tem nas extremidades 5’ o fluorifito, que vai emitir fluorescência, e na 3’ uma substancia que inibe a emissão da fluorescência). Quando a taq faz a polimerização, ela degrada essa sonda, que é especifica para região, ela libera o fluorofito, emitindo a fluorescência.
2 primers + 2 sondas espeficicas + taqman Técnicas