ROteiro

DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS EM ALIMENTOS PELO MÉTODO DE BIURETO UTILIZANDO ESPECTROFOTÔMETRO

Princípio
Para se determinar proteína existem diversos métodos como Biureto, método de Lowry, método de Kjeldahl. O método biureto se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução, sendo o tartarato de sódio recomendado. O cobre, em meio alcalino, reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. (ZAIA, 1998)

Objetivo
Determinar proteínas pelo método de Biureto.

Materiais
Balança analítica;
Chapa elétrica;
Espectrofotômetro;
Albumina bovina;
Balão volumétrico de 100 mL;
Bastão de vidro;
Béquer de 100 mL;
Espátula;
Funil;
Grade para tubo de ensaio;
Papel filtro;
Pipeta graduada de 1 mL;
Pipeta graduada de 2 mL
Pipeta graduada de 5 mL;
Proveta de 50 mL;
Reagente de biureto;
Solução de NaOH 0,5N;
Solução de NaOH 10%;
Sulfato cúprico;
Tartarato de sódio e potássio;

Procedimento

Curva padrão:
1. Numerar os tubos de ensaio;
2. Preparar as diluições da curva padrão (6 tubos);
3. Em cada tubo colocar alíquotas de: 0,4 – 0,8 – 1,2 – 1,6 – 2,0 – 2,4 mL da solução padrão de albumina do soro bovino (0,03g/mL);
4. Adicionar no mesmo tubo, respectivamente: 2,6 – 2,2 – 1,8 – 1,4 – 1,0 – 0,6 mL de água destilada;
5. Retirar um alíquota de 1 mL de cada tubo e transferir para outros dois tubos;
6. Adicionar 4 mL do reagente de biureto em cada tubo, agitando-os;
7. Deixar em repouso por 30 minutos;
8. Ler a absorbância a 540 nm no espectrofotômetro.

Preparo da amostra:
1. Pesar aproximadamente 1g de amostra triturada;
2. Transferir para um béquer de 50 mL;
3. Adicionar 20 mL de água destilada e 1 mL de NaOH 0,5N;
4. Misturar com um bastão de vidro;
5. Aquecer o béquer em chapa elétrica e a partir do momento da fervura, aguardar 3 minutos para solubilizar a proteína;
6. Esperar a amostra