relatório proteinas totais
As proteínas são moléculas grandes, presentes em todos os seres vivo e formadas por sequências de aminoácidos ligados por ligações peptídicas apresentando, portanto, uma estrutura única e tridimensional. Essa estrutura é o que determinará sua função no organismo dos seres vivos. Quando a proteína está em sua condição mais estável termodinâmicamente, exercendo uma função específica biológica, denominamo-la nativa.
Dosagem de Proteínas pelo Método do Biureto.
O biureto é uma substância formada pela mistura de cobre, hidróxido de sódio e um complexo que estabiliza essa mistura. Dessa forma, quando em solução que contenha proteínas, essas formam um complexo púrpura, em soluções salina, uma vez que o íon cuproso se liga ao nitrogênio dos aminoácidos. Assim, podemos estimar a concentração da solução que contenha proteínas, quando colocamos a amostra em um espectrofotômetro, emitindo luz monocromática de comprimento de onda de 540 nm. Não deve ser utilizado o comprimento de onda de 270 nm, uma vez que a probabilidade de outros aminoácidos ou substâncias absorverem luz nesse comprimento e interferirem negativamente no resultado é alta.
Temos ainda que, pela lei de Lambert-Beer “a absorbância A é diretamente proporcional À concentração do soluto absorvente”
Para comparar as concentrações das amostras, é utilizado um tubo branco, contendo somente biureto. Dessa forma, o espectrofotômetro é ajustado de modo que identifique absorbância zero. Ao final das medições, é possível montar o gráfico da curva padrão da proteína.
Materiais
Amostra de sangue sem anticoagulante.
03 tubos de ensaio pipetas de 0,02 ml padrão kit regente biureto proteínas totais centrifuga espectrofotômetro cronômetro banho Maria 37ºC
Procedimento
Coletar as amostras de sangue e centrifugar por 5 minutos.
Separar soro e distribuir seguindo as orientações abaixo.
Identificar três tubos de ensaio:
Branco