Relatório imunologia

Disciplina: Imunologia

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA 6:
Obtenção de células da cavidade peritoneal: preparo para cultivo celular.

Belo Horizonte
2012
1) Procure na literatura uma forma de se medir:
- A atividade fagocítica dos macrófagos ou a atividade de linfócito T. Explique a base da técnica. Não se esqueça de citar a referência, de acordo com as normas da ABNT.

1ª Etapa – Observação de Macrófagos:

Ocorre mediante a obtenção de células peritoniais, utilizando-se animais controle, falso operado e lesado medular que devem ser exsanguinados por decapitação. Após a remoção da pele da região abdominal, 10 mL de tampão fosfato-salina (PBS-estéril), pH 7,4, devem ser injetados na cavidade peritoneal dos animais. Trinta segundos após a administração, a cavidade peritoneal deve ser aberta e o fluido, contendo as células, aspirado com o auxilio de pipeta Pasteur de plástico, estéril. Em seguida, estas células devem ser centrifugadas ( Eppendorf – Centrifuge 5810 R ) a 1200 rpm, 4°C, durante 5 minutos. Os macrófagos então, após descarte do sobrenadante, devem ser ressuspensos em 3 mL de PBS (TANHOFFER, 2004).

2ª Etapa – Determinação da Atividade Fagocítica:

Para que ocorra a mediçao da atividade fagocítica, devem ser realizadas as seguintes etapas: depositar 100 µL da solução de macrófagos obtidos, como descrito acima, em placa do tipo ELISA e adicionar 10 µL de zymosan ( 2,2 x 108 particulas/mL ) corado com vermelho neutro e incubar por 30 minutos. Após este procedimento, devem ser adicionados 100 µL de fixador para interromper o processo de fagocitose e, 30 minutos depois a placa deve ser lavada com PBS e, posteriormente, centrifugada por 5 minutos a 1.500 rpm, a fim de remover o zymosan e o vermelho neutro não fagocitados pelos macrófagos. O vermelho neutro no interior dos macrófagos deve ser solubilizado utilizando-se 100 µL de solução de extração. Após 30 minutos deve ser procedida a leitura das placas, a