Relatório Cromatografia

Técnicas de Análises Bioquímicas:
Cromatografia líquida

Data: 18/03/2014

Introdução

A cromatografia líquida de gel filtração por exclusão se baseia no uso de uma fase estacionária porosa, sendo essa uma resina, que permite a separação de macromoléculas por tamanho molar. Por esse método, pode-se purificar e analisar amostras diversas.
Na coluna, a fase estacionária é formada por um polímero com ligações cruzadas, contendo poros de tamanho determinado. O tamanho dos poros é determinado pelo mesh da coluna.
Quando macromoléculas de tamanho grande são eluídas através da coluna, estas são incapazes de passar por dentro dos poros, sendo eluídas diretamente pela coluna e formando o volume morto. Diferentemente, macromoléculas menores ficam retidas pelos poros e demoram mais até serem completamente eluídas, permitindo a separação e formando o volume final.
Esse método requer uso contínuo da fase móvel, que permitirá a passagem da amostra pela fase estacionária até que esta seja completamente eliminada da coluna. Funciona também como um método rápido de dessalinização de soluções.

Objetivo

Realizar a separação de dois corantes de tamanhos molares distintos, sendo estes o Azul de Dextran (2.000.000 Da) e o Vermelho de Metila (300 Da), utilizando a cromatografia por exclusão, visando analisar a eficiência do método. A eficiência será analisada pela análise dos resultados, através da confecção de um cromatograma.

Resultados

Após a cromatografia, confeccionou-se um cromatograma com os resultados de absorbância obtidos por espectrofotometria das amostras obtidas, sendo este mostrado abaixo.

Figura 1: Cromatograma confeccionado com as absorbâncias das amostras obtidas na cromatografia por seus respectivos volumes de eluição

O cromatograma foi confeccionado com o uso dos seguintes resultados de absorbância na espectrofotometria:

Volume de eluição (mL)
Abs a 560nm

Abs a 620nm

4
1,1538
3,49E-02
6
0,2108
0,3549
8