Relatório Bioquimica

Objetivos:
Estudar as influências da variação da concentração de substrato e da enzima na velocidade da reação enzimática da invetase, bem como a influência da temperatura, variação de pH.
Examinar as curvas obtidas, calcular alguns parâmetros cinéticos(Km e Vmax) e discutir seus valores e importância.

Materiais:
3,5 – DNS (ácido 3,5 dinidrosalisílico)
Tartarato de sódio e potássio
Acetato de sódio 20 mM pH 4,8
Sacarose
Tubos de ensaio (180 x 20 mm)
Água
Gelo
Biureto

Métodos:
A- Os tubos foram numerados e adicionados os reagentes.

Em seguida a adição do DNS, os tubos foram colocados em banho maria por 10 minutos. Acabado esse tempo os tubos foram esfriados em água corrente e adicionado 16 mL de água destilada.

Foi homogeneizado e lido as absorbâncias a 540 nm contra o branco.

Um gráfico foi construído (A540 vs. umol de sacarose hidrolisada)

B- Os sete tubos foram numerados.

Foram colocados no gelo e adicionados os reagentes.

Após a adição da enzima os tubos foram agitados suavemente.

Em seguida os tubos foram colocados em banho maria a 37ºC por 5 minutos.

Após esse tempo os tubos foram levados imediatamente para o gelo.

Ainda no gelo foi adicionado 2 mL de DNS em cada tubo.
Os tubos foram levados para banho maria a 95ºC por 10 minutos. Tempo terminado os tubos foram esfriados em uma tigela com água e adicionado 16 mL de água destilada em cada tubo.

Foi homogeneizado por imersão total os tubos.

Foram lidas as absorbâncias a 540 nm contra o branco.

Foi feito um gráfico da velocidade inicial Vo (umol de sacarose hidrolisada/min) vs. concentração inicial do substrato (uM de sacarose) com os valores obtidos para os tubos 1-6.

Um gráfico de Lineweaver-Burk foi feito e calculado os valores e Vmax e Km para a sacarose com os valores obtidos para os tubos 1-6. Foi comparado os valores de Km com o encontrado na literatura cientifica.

C- Os tubos foram numerados e adicionados os reagentes.

Os tubos 1-2 são