Relat Rio Enzimas 3

Ação enzimática: Influência da temperatura sobre atividade de invertase

1. Introdução A determinação da atividade enzimática envolve a medida da velocidade de reação. Pode ser medida com a enzima pura e em condições tais que permita que a velocidade de reação seja máxima, de modo a permitir que toda a enzima esteja transformada em um complexo ativado. Neste caso a velocidade da reação proporcional ao complexo ativado. Alguns fatores podem influenciar a ação das enzimas. Na maioria das vezes, temperaturas elevadas tende a elevar a velocidade da reação, isso porque, um aumento da temperatura do meio onde a reação se processa provoca um aumento na energia cinética das moléculas, que consequentemente aumenta a taxa de choques num intervalo de tempo. No entanto, a partir de um determinado valor de temperatura a proteína enzimática começa a desnaturar, diminuindo a sua atividade. (JUNIOR,2002).

2. Objetivo
Avaliar a influência da temperatura sobre a atividade de invertase na conversão de sacarose a glicose. Determinar a temperatura ótima de atuação da enzima.

3. Metodologia
3.1. Material
Solução de sacarose 0,02M
Invertase 400mg% (4mg/ml)
Tampão acetato de sódio 0,05M pH 4.7
Reagentes DNS
Banho-maria a 37ºC; 55ºC; e 100ºC
Banho de gelo
Becker com água a temperatura ambiente
Espectrofotômetro
Tubos de ensaio

3.2. Procedimento
Numerar 5 tubos de 1 a 5 e adicionar sacarose e tampão conforme tabela abaixo:

Tubos

1
2
3
4
5
Sacarose
0,02M (mL)

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5
Tampão (mL)
0,55
0,55
0,55
0,55
0,55
Pré- incubar os tubos 1, 2, 3, 4, 5 respectivamente a 0°C (banho de gelo), 24°C (temperatura ambiente), 37°C, 55°C e 100°C durante 5 minutos.
Adicionar 0,05 mL da solução de invertase aos tubos. Anotar para cada tubo a hora de adição.
Após 4 minutos, adicionar 1 mL de DNS a cada tubo e posteriormente mante-los a 100°C/5 min. Resfriar e posteriormente adicionar 13 mL de água. Homogeneizar e ler absorbância a 540 nm. Zerar o equipamento com solução contendo 1