Reações de precipitação de proteínas

Reações de precipitação de proteínas

Objetivo: Observar as reações de proteína com soluções que modificam suas estruturas secundárias, terciárias e quartanárias.

Experimento nº1: Precipitação por sais neutros

Reagentes:
Solução de proteínas (clara de ovos ou plasma sangüíneo)
Solução saturada de sulfato de amônio

Procedimento:
Foi colocado em um tubo de ensaio 2mL de solução de proteínas. A seguir, adicionamos ao tubo 2mL da solução de (NH4)2SO4.
A solução ficou turva com precipitado.,Ou seja , modificaram as estruturas secundárias e terciárias da solução de proteínas. Após a observação, misturamos por inversão e a solução de homogeneizou.
Adicionamos 2mL de água destilada e misturamos por inversão, que deixou de ser turva.
Portanto com adição de pequenas quantidades de sal, a solubilidade tendeu a aumentar – salting in.

Experimento nº2: Precipitação por sais de metais pesados (não realizado)
Reagentes:
Solução de proteínas
Solução de acetato de chumbo a 20g/dl

Experimento nº 3: Precipitação por ácidos fortes
Reagentes:
Solução de proteínas
Solução de ácido tricloroacético a 10 g/dL
Procedimento:
Colocamos em um tubo de ensaio 1mL da solução de proteínas. Foi adicionado 0,5mL da solução de ácido tricloroacético. A solução ficou heterogênica, pois o
A proteína ficou em um meio de pH abaixo do ponto isoelétrico. Os íons negativos do ácido utilizado interagiram com as cargas positivas das proteínas. Estas por sua vez, formaram precipitado e desnaturaram suas estruturas secundárias e terciárias. Adicionamos 5mL de água destilada. A redissolução da proteína ocorreu pela aproximação de pH ao seu ponto isoelétrico.

Experimento nº 4: Precipitação pelo calor
Reagente:
Solução de proteínas em banho-maria.

Procedimento:
Colocamos no tubo de ensaio 5mL da solução de proteínas e levamos ao banho-maria fervente por 5 minutos.
Retiramos o tubo e observamos que a solução estava esbranquiçada, pois ouve desnaturação