quantificação de açúcares redutores

QUANTIFICAÇÃO DE AÇÚCARES-REDUTORES EM AMOSTRA BIOLÓGICA

Alunos: Allan Pereira
Diego Chemello Müller
Leonardo Bittencourt Lara

Professoras: Alessandra Nejar Bruno
Bianca Pfaffenseller

Local: Laboratório de Bioquímica

Porto Alegre, 18/11/2013.
Sumário

1. OBJETIVO Utilizar um método espectrofotométrico de quantificação de carboidratos para determinar a concentração de açúcares-redutores em amostra biológica pelo método do ácido 3,5-dinitrosalicílico (ADNS).

2. INTRODUÇÃO Quantificar açúcares é uma rotina muito importante na rotina de laboratórios ou indústrias comprometidas com os processos fermentativos. A capacidade fermentativa dos microorganismos utilizados nesses processos reflete diretamente na disponibilidade de substratos energéticos para o início das reações que terminarão em um produto desejado. Havendo uma concentração baixa de substrato a probabilidade dos microorganismos encontrarem moléculas para iniciarem a fermentação é mais baixa, o que ocasionaria uma eficiência menor, que é decisiva para o lucro de indústrias que os realizam comercialmente. No método do ácido 3,5-dinitrossalicílico (ADNS), usado para quantificar açúcares redutores, ocorre uma reação (figura 1), em meio alcalino, com o referido ácido convertendo-se em ácido 3-amino-5-nitrossalicílico por ação dos açúcares redutores, dando origem a um complexo tijolo, que por sua vez é quantificado espectrofotometricamente.

Figura - Figura 1: Reação de oxidação da carbonila pelo reagente DNS

Através dessa mudança de coloração é possível construir roteiros de ensaios colorimétricos e medir a quantidade de açúcares relacionando a quantidade de DNS reduzido (a estequiometria da reação é 1:1). Todavia, um dos principais substratos para a fermentação de microorganismos é a sacarose, que não possui poder redutor, é necessário neste caso, a hidrólise ácida desses açúcares em glicose e frutose, para apenas depois disto proceder como uma análise