Purificação e caraterização de proteínas

Purificação e caraterização de proteínas Uma célula contem milhares de moléculas de proteínas diferente, separa-las e uma tarefa extremamente difícil.
Há várias técnicas para purificar e caracterizar uma proteína. Quando elas forem se degradando até seus aminoácidos, eles poderão ser identificados por cromatografia de acordo com alguns fatores como sua carga e polaridade. Extrair proteína pura de uma célula;
A separação e o isolamento de proteínas, e a primeira etapa. Várias etapas são executadas para se eliminar contaminadores e se chegar a uma amostra pura.
Esperamos que, quando a proteínas estiver pura, restara produto suficiente para o estudo e a caracterização. Isolamento de proteínas das células. Antes que as etapas da verdadeira purificação possam começar, a proteínas deve ser liberada das celular e de organelas subcelulares.
A primeira etapa e chamada de homogeneização, a abordagem mais simples e moer o tecido em um liquidificador com um tampão adequado, as celular são rompidas e liberam as proteínas.
Depois que as celular são homogeneizadas, elas são submetidas a centrifugação diferenciada, depois que as proteínas são solubilizadas, elas são frequentemente submetidas a uma purificação com base em sua solubilidade, o reagente mais utilizado nessa etapa e o sulfato de amônio.
Essa técnica preliminar, em geral não dará uma amostra com alta pureza, mas tem a importante tarefa de preparar para os procedimentos mais eficientes a seguir. Cromatografia em coluna;
Baseia-se no fato de que compostos diferentes podem se distribuir por diversos pontos entre fase diferentes, ou porções separáveis da substancias, as duas fases são fase estacionaria e fase móvel.
A cromatografia de afinidade utiliza as propriedades especificas de ligação de diversas proteínas. Cromatografia de troca iônica e logisticamente similar a cromatografia de afinidade, utilizando nas duas uma coluna de resina que liga a proteínas em questão, no entanto, na cromatografia de troca