Procedimento Operacional Padrão

Procedimento Operacional Padrão – POP
Coloração de Gram
Objetivos
Este POP estabelece critérios e procedimentos cujo objetivo seja aplicar a técnica de Coloração de Gram. Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.
Princípios do método
Baseado na impregnação pelo cristal violeta (corante primário) na parede celular de algumas espécies bacterianas forma um complexo com uma solução fraca de iodo (lugol-mordente). Estas espécies, devido à natureza química de sua parede celular, retém o cristal violeta mesmo após o tratamento com descorante orgânico (álcool-acetona) e são chamadas de Gram Positivas. As bactérias que perdem a coloração primaria são ditas Gram Negativas, sendo depois coradas pelo corante secundário (Fuccina de Ziehl diluída), torando a coloração rósea. Outras estruturas (leucócitos PMN), células, também poderão tomar esta coloração. Além da morfologia, de leucócitos (PMN) de hemácias, muco, filamentos de fungos ou de leveduriformes.
Procedimentos
Preparar esfregaços a partir de culturas puras de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Serratia marcescens.
Corar os esfregaços pelo método de coloração de Gram. c- Observar ao microscópio óptico, sob imersão e identificar a morfologia deste microrganismos e sua reação frente ao método de Gram. Preparo do esfregaço:
Pegar uma lâmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na chama do bico de Bunsen;
Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço;
Flambar a alça bacteriológica deixá-la esfriar e colocar na lâmina uma gota de solução salina fisiológica;
Flambar a agulha bacteriológica, deixar esfriar próximo a chama, abrir a placa com a cultura teste e tocar a colônia escolhida para retirada da amostra,
Esfregar o material com movimentos de rotação da alça