organelas e macromoléculas
1- Colocando 3 ml de água acidulada em uma gral ou almofariz. A razão para usarmos água acidulada é porque o pigmento antocianina que nós iremos separar dos cloroplastos é rosa ou roxo em pH ácido, mas verde em pH alcalino. Nós iremos separar a antocianina da clorofila, que também é verde, ficaria difícil de notar a diferença dos dois pigmentos em pH alcalino.
2- Nós esmagávamos 2 a 3 folhas de Tradescantia nessa solução com um pistilo.
3- Transferíamos com uma pipeta Pasteur a parte líquida do homogenato para dois tubos de microcentrífuga (1 ml em cada tubo).
4- Centrifugava a 12.000 rpm por 5min. Podia ver claramente, após a centrifugação, que o sobrenadante é um líquido roxo, pela presença do pigmento hidrossolúvel antocianina. No fundo do tubo ficava um precipitado verde, pela presença dos cloroplastos, que são organelas grandes e mais densas e por isso vão para o fundo do tubo.
5- Transferia os sobrenadantes dois novos tubos enumerados 1 ou 2.
6- Com uma pipeta Pasteur, ressuspenda os precipitados (cloroplastos) em água acidulada (2 X 300 µL).
7- Acrescentava duas gotas de detergente no tubo 1 “verde” e agitava o tubo por mais ou menos um minuto. No tubo 2, adicionava duas gotas de água acidulada( não agite)
8- Centrifugava a 12.000 rpm por 5 minutos os dois tubos continha a “solução verde”.
9- Observávamos o que aconteceu com o material contido nos dois tubos.
10- Adicionava 2 ou 3 gotas de solução básica (NaOH diluído) nos tubos com “solução roxa” irá agitar e veja observe a cor da solução.