Nested PCR

Conceito
A Nested – PCR é uma otimização da técnica de REAÇÃO EM CADEIA DE POLIMERASE (PCR), onde nessa técnica é realizado um segundo ciclo de amplificação sendo que o produto da primeira amplificação é utilizado como alvo.
Na primeira fase, são utilizados um par de primers externos ao seguimento de DNA, e na segunda amplificação, é utilizado um par de primer interno, que são localizados internamente a sequência anteriormente amplificada.
Para o artigo estudado em questão, a Nested – PCR demostrou maior eficiência no resultado final, porém devido ao possível excesso de primers utilizados nessa técnica, ocorreu o surgimento de bandas inespecíficas, o que pode representar para o caso, uma desvantagem do método. Outra desvantagem do método é devido ao fato de ser necessário abrir os tubos de reação no final da primeira amplificação, podendo gerar uma contaminação por material genético endógeno.
Foi apresentado um método de nPCR em Tubo Único, onde não há a necessidade de abrir quaisquer tubo durante a reação, minimizando as contaminações endógenas.
Em um dos processo de nPCR em Tubo Único, a troca da atividade dos primers externos pelos internos ocorre por mudança de temperatura de anelamento. Berg et al (2001) descreveram uma nPCR no mesmo tubo, onde é utilizado óleo mineral para separar os primers internos dos externos. Após a centrifugação no final da primeira etapa de amplificação, os primers se anexam a mistura da reação. Outro método é utilizar uma ponteira para compartimentalizar a mistura de reação da segunda etapa, sendo essa ponteira colocada dentro do tubo onde ocorre a reação.
Por fim, foi desenvolvido uma técnica de nPCR em tubo único (STNPCR), Abath, et al. (2000), onde o par de primers internos é fixado por evaporação na interface interna da tampa do tubo de amplificação. No interior do tubo, além dos primers externos, são adicionados os outros reagentes necessários à reação de PCR. Após a primeira etapa de amplificação, o tubo é invertido várias