Método Western Blot

Western Blot-Método de análise em proteínas individuais. A primeira etapa dele é através do SDS-PAGE.Obs: SDS(detergente aniônico e transfere cargas negativas para moléculas).Obs: PAGE-Eletroforese em gel de poliacrilamida. Formam gel mais denso que o de agarose.
O detergente desnatura as proteínas e transfere cargas negativas a elas. A proteína migra pelo gel e a medida que migra a proteína vai desnaturando e se observa que as proteínas mais pesadas demoram mais a passar pelo gel. A função disso tudo é linearizar a estrutura da proteína. Ao final vê-se um padrão de bandas de proteínas.
Em seguida as proteínas são transferidas para uma membrana de nitrocelulose através de um papel filtro umedecido por uma solução tampão que auxilia na formação de corrente elétrica. A membrana tem carga positiva para falicitar a proteína se ligar nela. É estabelecida uma diferença de potencial para fazer com que as proteínas migrem pela membrana.
A próxima etapa da técnica utiliza anticorpos específicos para a proteína utilizada. Os anticorpos são produzidos anteriormente. Banha-se as proteínas com anticorpos. Retira-se o excesso deles. Depois são utilizados anticorpos conjugados que reconhecem outros anticorpos. Eles possuem na sua extremidade uma enzima que na adição de um substrato ocorre a modificação da cor ou gera uma fluorescência diferente. Os mais usados são os que mudam a fluorescência já que os mudam de cor não são muito sensíveis. A fluorescência impressiona filme radiográfico e ao se comparar com filme original identifica-se qual proteína mais expressa que nesse caso foi a amostra 3 e a5 não teve expressão significativa.
Existe outras formas de estudar o genoma ou proteoma completo, como o genoma (análise do DNA), transcriptoma(análise do RNA) e o proteoma (análise das proteínas do indivíduo. Pra isso se usa eletroforese bidimensional , usado para fazer comparações entre perfis de proteínas diferentemente expressas entre células cancerígenas e normais ou