Microscopia
MICROSCOPIA
Métodos de estudo
MICROSCOPIA
ÓPTICA (de luz)
1
Resolução:
Menor distância para que duas partículas apareçam como objetos separados
Abertura numérica das objetivas e limite de resolução conseguido com os microscópios utilizados nas aulas práticas de Citologia e Histologia Geral.
Características
LR = K (0,61) X λ (comp. de onda = 0,55)
AN (na objetiva)
Objetiva de imersão Limite de resolução (μm)
4x
40x
0,10
3,36
10x
100x
0,25
1,34
40x
400x
0,65
0,52
100x
1000x
1,25
0,27
Distância entre objetiva e o espécime (mm)
29,0
6,30
0,53
0,29
Ampliação da objetiva
Limite de Resolução:
Lentes objetivas “a seco”
Ampliação total*
Abertura numérica (AN)
Maior A.N. = Menor L.R. = ↑ resolução.
Células da bochecha (sem corantes)
Cloroplastos em espiral
(alga verde)
TÉCNICAS
Microscopia de luz:
Etapas:
Coleta
Fixação
Observação à fresco.
Preparação de material permanente.
Desidratação
Clareamento ou Diafanização
Inclusão
Corte
Montagem e Coloração
Interpretação dos cortes histológicos
2
Corte
micrótomo
3
Coloração:
• Estrutura de natureza básica corante ácido = estrutura acidófila.
→
• Estrutura de natureza ácida corante básico = estrutura basófila.
→
Variedades de microscópio de luz:
Contraste de fase (visualização de tecidos vivos).
Variedades de microscópio de luz:
Polarização (luz polarizada = moléculas longas).
Variedades de microscópio de luz:
Fluorescência (radiação ultra-violeta).
4
Variedades de microscópio de luz:
Confocal (raio laser gera imagens).
microfilamentos de actina + núcleo
microfilamentos
microtúbulos
Epitélio ciliado da traquéia
células vegetais em diversas fases da mitose
5
células do sangue
artéria muscular
pele humana
MICROSCOPIA
ELETRÔNICA
DE
DE
TRANSMISSÃO
6
Etapas:
Coleta
Fixação
Desidratação
Inclusão